14-3-3蛋白(180kda蛋白marker条带)

收集14-3-3蛋白的资料?

14-3-3结合的靶蛋白特性

到目前为止,可与14-3-3结合的蛋白达到了100种以上。

靶蛋白要想与14-3-3结合多数需要首先发生磷酸化,如与14-3-3结合的色氨酸/酪氨酸羟化酶、Raf、Bcr、BAD、角蛋白K18,植物的硝酸盐还原酶就是以这种方式结合的。已经证实可与14-3-3结合的两个高亲和性磷酸化依赖的结合基序分别是:RSXpSXP (mode 1) and RXXXpSXP(mode 2)(其中pS代表磷酸化的丝氨酸)。另外,还有一个低亲和的位点。高亲和性位点就像一个看门人,用以招募14-3-3二聚体,当二聚体中的一个单体结合到该高亲和性位点时,仍然允许另一半单体分子结合到低亲和性位点。

与14-3-3结合的大多数蛋白要么具有mode1要么有mode2的基序,但是也有例外情况,一些蛋白没有这些基序而以非磷酸化依赖的方式与14-3-3结合的蛋白,如IGF-I受体、IRS-1、cdc25B、vimentin和Wee1。尽管这些蛋白没有这些基序但具有相似的结合袋。这些基序的磷酸化是与14-3-3结合的重要调节方式,但是有些蛋白发生脱磷酸化又会意外的创造一个新的基序。◎

令人惊奇的是,除了上述两种结合方式之外还发现14-3-3可与Raf非磷酸化的锌指结构域和一些植物蛋白的PHD(相当于锌指结构)结构域上游的亮氨酸拉链区结合。

marker条带不清晰原因?

1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;

2. 电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液;

3. 电泳条件不合适。电泳时电压应不超过20V/cm,温度应低于30℃;

4. marker上样量过多。请根据说明书选用合适上样量;

5. 凝胶质量不好。建议使用质量较好的琼脂糖;此外,凝胶凝固不均匀也会导致条带模糊。.

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